❤️الســــلامے ؏ــــليــــكــــمے...😁
(¯`v´¯)
.`•.¸.•´ ★
¸.•´.•´¨) ¸.•¨)
(¸.•´(¸.•´ (¸.•¨¯`*

💜نستقبل اسئلتكم واقتراحاتكم على
❤️الساي ات(الفيدباك) ...😉❤️
💜يسعدنا تواصلكم معنا...☺️😌
❤️متابعه مفيده وممتعه.....😍💜😍

‏✿♬ﾟ+.(#آلُۆتٌــــــــيَــــــــنْ)♪.+ﾟ♬✿💜
‏http://sayat.me/alwateen94

هذا التحليل شنو يعني بي

تحليل النوع الوراثي لفايروس التهاب الكبد الفايروسي نوع C
طريقة اجراء اختبار(HCV Genotype)

•
تقنية التهجين المناعي ( Immuno blotting Hybridization) لتحديد النوع الوراثي للفيروس الكبدي سي (HCV Genotype)
يجرى هذا التحليل لتحديد النوع الوراثي للفيروس الكبدي "سي " وتستخدم هذة التقنية طريقة التهجين العكسي) (Reverse Hyperdizationلمنطقة تدعى الـ (5-UTR) اختصارا (UN Translated Region) في جينوم الفيروس في عينة المصاب مع باديئات معلمة ومتخصصة للأنواع الوراثية المختلفة للفيروس(Specific Probe Genotype) الموجودة في أشرطة الكاشف التي تحتوي على تتابعات معينة من ( Oligonuclutide ) وهي الجزيئات الاولية المكونة للحمض النووي (RNA) , وكل خط في هذة الشرائط تنتظم فيه(Oligonuclutide) بتتابع معين ترمز لنمط جيني مختلف , سميت هذة الخطوة بالتهجين العكسي لاننا نمرر(Biotinylated DNA) الذي يرتبط بنوع من الفيتامين يدعى Biotin)) , وهذا الفيتامين لة قابلية الارتباط وبشدة مع بروتين يدعى (Avidin) يعلم به انزيم يستخدم في مرحلة الكشف عن حدوث تطابق مثالي بين (Oligonuclutide) المهجن للفيروس والتتابعات الموجودة في الشريط ويظهر على شكل راسب بنفسجي تسهل رؤيتة. حيث اننا نتحدث على مستوى جيني لا يمكن رؤية مكوناته بالعين المجردة وانما يحتاج لنظام كاشف خاص وقد استخدم في اجراء هذا الإختبار الكاشف HCV Genotype Assay(LiPA) من شركة Bayer Health Care ويختبر هذا الكاشف 20 عينه فقط .

نوع العينات المستخدمة:
يستخدم لإجراء هذا الإختبار نواتج تكبير الحامض النووي للفيروس الكبدي "سي "(Amplicon ).

محتويات الكاشف:

1)منصة بلاستيكية تثبت عليها قنوات طولية مجوفة بطريقة تسمح لشرائط النيتروسليولوز بالإنغمار بها و كل منصه تحتوي على 8 قنوات كل قناة مخصصة لعينة واحدة فقط.
2)20 شريط نيتروسيليولوزي معلمة بتتابعات معينة من Oligonuclutide ) ) التي يرمزكل منها لنمط جيني مختلف من الفيروس ومحفوظة في أنبوبة بلاستيكية.
3)لاصقات شفافة مانعة للتسرب.
4)محلول الغسيل (Stringent Washing Solution) .
5)عبوة المتلازم الإنزيمي المركز( (Consantraed Conjugate.
6)عبوة محلول المتلازم الإنزيمي المخففDiluant) .(Conjugate
7)عبوة الـكاشف اللوني للرابط الإنزيمي المركز(Consantraed Substrate) .
8)عبوة محلولالـكاشف اللوني للرابط الإنزيمي المخفف ( (Substrate Diluant.
9)عبوة محلول الشطف المركز (Consantraed Rinse Solution).
10)عبوة محلول تفكيك الحامض النووي (Denaturation Solution).
11)عبوة محلول التهجين (Hyperdization Solution).
12)ورقة العمل (Woorking Sheets ) .
13)بطاقة قرائة النتائج المحتوية على العلامات الإيجابية للأنواع الوراثية المختلفة للفيروسReading Card)) .
14)جدول تحليل النتائج يحتوي على مخطط لتعريف الأنواع الوراثيه المختلفة من الفيروس الكبدي "سي" (Interpretation Chart)

ملاحظات قبل اجراء الاختبار:

•أخذ الاحتياطات اللازمة لعدم التلوث ومراعاة عدم التنقل بين مناطق العمل المختلفة للحصول على نتائج دقيقة.
•يجب ان تكون جميع محتويات الكاشف في درجة حرارة الغرفة (20ºم - 25º م) قبل بدء العمل بنصف ساعة وعند انتهاء العمل يجب اعادتها فورا الى الثلاجة.
•استخدام حمام مائي هزاز بغطاء مائل مزود بتيرمومتر معاير ودقيق والمحافظة عليه مغلق الغطاء للمحافظة على ثبات درجة الحرارة المطلوبة لإتمام التفاعل وهي (5ºم ± 55º م) وذلك لما لدرجة الحرارة من أهمية في إتمام عملية التهجين و دقة النتائج.
•ضبط مستوى الماء في الحمام المائي لتكون بين ثلث الى نصف ارتفاع منصة القنوات منعا" لتلوث خانات الاشرطة بماء الحمام المائي واستخدام مسكات داخلية لتثبيت الطبق داخل الحمام المائي منعا" لانزلاقة.
•يجب ضبط سرعة الحمام المائي الهزاز وجهاز رج منصة قنوات الإختبار بعناية لضمان مضاعفة حركة الكواشف على الأشرطة بدون تدفق المحاليل واختلاطها بين قنوات الاشرطة.
•استخدام الملقاط في تناول الشرائح النيتروسيلولوزيه وعدم ملامستها باليد حتى لاتفسد عملية التهجين واظهار الالوان بواسطة كريمات اليدين.
•استخدام قلم الرصاص في كتابة الارقام اعلى الشرائط لأن كواشف فحص المعايرة قد تزيل الحبر من الاشرطة.
•المحافظة على الأشرطة في مكانها المخصص داخل منصة القنوات والحرص على عدم جفاف الأشرطة اثناء اجراء الاختبار.
•استخدام الماصات البلاستيكية المعقمة ذات الإستخدام الواحد عند التخلص من المحاليل داخل قنوات المنصة.
الخطوات الاساسية للاختبار:
1-Denaturation ) (فك الزوج الحلزوني المترابط للحمض النووي الفيروسي المكبر(Amplicon ) باستخدام مادة قلوية تغير من طبيعة الاحماض النووية.
2- ( Hyperdization )عملية التهجين السابقة الذكر.
3-( Washing the Strips ) غسل الشريط عدة مرات لازالة المركبات الغير مرتبطة بالشريط وذلك لزيادة كفاءة التطابق بين مكونات الشريط وجين الفيروس المضا

ف.
4-( Dtection ) الكشف عن حدوث تطابق بين (Oligonuclutide)المهجن للفيروس في العينة المختبرة والتتابعات الموجودة في الشريط باستخدام انزبم .(Alkalin Phosphatase) المرتبط بـ ( Streptoavidine )حيث يظهرالتطابق على شكل راسب بنفسجي تسهل رؤيتة بالعين المجردة .
التحضيرات :
•تحضير محلول الشطف (solution Diluted Rinse)

1.نسبة التخفيف من 5:1 ماء مقطر
2.تحتاج كل عينة الى 8 مل من محلول الشطف ويحضر بإضافة 8 مل من الماء المقطر الى 2مل من محلول الشطف المركز (Consantraed Rinse Solution).
3.يحافظ المحلول بعد تخفيفة على جميع خواصة لمدة أسبوعين اذا حفظ في درجة حرارة من (2˚- 28˚م).

•تحضيرمحلول المتلازم الإنزيمي Diluted Conjugate Solution))
1.نسبة التخفيف من 100:1 من محلول ((Conjugate Diluant
2.يحضر 2مل من محلول المتلازم الإنزيمي لكل عينة بحيث يضاف 20µ من المتلازم الإنزيمي المركز(( Consantraed Conjugate الى1980µ من محلول المتلازم الإنزيمي المخففDiluant) (Conjugate = 2مل.
3.يحافظ المحلول على خواصه بعد التخفيف لمدة 24 ساعة اذا حفظ في مكان مظلم في درجة حرارة الغرفة (20ºم - 25 ºم ) .

•تحضيرالكاشف اللوني للمتلازم الإنزيمي (Diluted Substrate Solution)

1.نسبة التخفيف من 100:1 من محلول الـكاشف اللوني للرابط الإنزيمي (Substrate Diluant).
2.يحضر 2مل من محلول الـكاشف اللوني للرابط الإنزيمي لكل عينه بحيث يضاف 20µ من الـكاشف اللوني للرابط الإنزيمي المركز (Consantraed Substrate) الى 1980µ من سائل الـكاشف اللوني للرابط الإنزيمي المخفف ( (Substrate Diluant.
3.يحافظ المحلول على خواصه بعد التخفيف لمدة 24 ساعة اذا حفظ في مكان مظلم في درجة حرارة الغرفة (20ºم - 25 ºم ) .



خطوات العمل :
1.يوضع محلول الغسيل (Stringent Washing Solution) و محلول التهجين Hyperdization Solution)) في حمام مائي عند درجة حرارة من (37ºم-50ºم ) لإذابة كريستالات المحلول وتجانسها ثم ترج المحاليل جيدا قبل الاستخدام.
2.تسجيل الكونترول السالب ثم أرقام العينات حسب الترتيب على ورقة العمل الخاصه بلإختبار .
3.ترقم قنوات الشرائط بأرقام العينات المراد فحصها مع اضافة قناه للكونترول السلبي.
4.يوض0µ من محلول Denauration)) في الجزء العلوي من القناة المخصصة للعينة.
5.يضاف باستخدام الماصة الى كل قناة 10µ من الحمض النووي المكبر للفيروس لكل عينه ((Amplicon الى محلول ((Denauration الموجود في أعلى القناه, ثم يتم خلطهم جيدا بواسطة الماصة أما قناة الكونترول السلبي فيوضع به ماء مقطر و تترك العينات في درجة حرارة الغرفه لمدة 5 دقائق.
6.يضاف 2 مل من محلول (Hyperdization) باستخدام الماصة القاذفه الى كل قناة من قنوات المنصه.
7.باستخدام الملقط المعقم توضع الشرائط المرقمة بأرقام العينات (بالقلم الرصاص) الى داخل القنوات المخصصة (الشريط والقناة مرقمين برقم العينة) مع مراعاة أن تكون واجهة الشريط للأمام وغير مقلوب.
8.تغطي منصة القنوات بغطاء بلاستيكي شفاف وتوضع بحرص داخل الحمام المائي الهزاز ((Vortex على سرعة 80 rpm وعند درجة حرارة 50˚م لمدة 60 دقيقة.
9.تنقل منصة القنوات من الحمام المائي الى الخارج وبحذر شديد يتم نزع الشريط اللاصق ثم التخلص من المحاليل بداخل القنوات باستخدام الماصات البلاستيكية المعقمة ذات الإستخدام الواحد.
10.يوضع 2 مل من محلول Solution) (Stringent Wash في جميع القنوات المخصصة في المنصه مع الهز اليدوي الخفيف لمدة تتراوح بين (10 -20 ) ثانية في درجة حرارة الغرفة (20ºم - 25 ºم ) .
11.بحذر شديد يتم التخلص من محلول Solution) (Stringent Washبداخل القنوات وذلك باستخدام الماصات البلاستيكية المعقمة ذات الإستخدام الواحد.
12.تكرر الخطوة 10 ثم الخطوة 11.
13.يضاف 2مل من محلول Solution) (Stringent Wash الى القنوات المخصصة في المنصه ثم تغطي المنصه بالغطاء البلاستيكي الشفاف وتوضع المنصه في الحمام المائي الهزازعلى سرعة 80 rpm وعند درجة حرارة 50˚م لمدة 30 دقيقة.
14.بحذر شديد يتم التخلص من محلول Solution Stringent Washبداخل القنوات باستخدام الماصات البلاستيكية المعقمة ذات الإستخدام الواحد.
15.يضاف محلول الشطف (solution Rinse) المحضر مسبقا لكل قناة من قنوات المنصه مع الهز الخفيف لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
16.يتم التخلص من محلول الشطف (solution Rinse ) بداخل القنوات باستخدام الماصات البلاستيكية المعقمة ذات الإستخدام الواحد.
17.تكرر الخطوة 15 والخطوة 16.
18.يضاف 2مل من محلول المتلازم الإنزيمي Conjugate Solution)) المحضر مسبقا الى القنوات ثم تغطي المنصه بالغطاء البلاستيكي الشفاف وتوضع المنصه على الهزاز ((Orbital shaker على سرعة 160rpm لمدة 30 دقيقة – ثم يتم البدء بتحضير الكاشف اللوني للمتلازم الإنزيمي((Substrate Solution.
19.يتم التخلص من محلول المتلازم الإنزيمي Conjuga

te Solution)) بداخل القنوات باستخدام الماصات البلاستيكية المعقمة ذات الإستخدام الواحد.
20.يضاف 2مل من محلول الشطف (solution Rinse) المخفف والمحضر مسبقا لكل قناة من قنوات الطبق مع الهز الخفيف لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
21.يتم التخلص من محلول الشطف (solution Rinse) بداخل القنوات باستخدام الماصات البلاستيكية المعقمة ذات الإستخدام الواحد.
22.تكرر الخطوة 20 والخطوة 21.
23.يضاف 2مل من سائل الكاشف اللوني للمتلازم الإنزيمي ((Substrate Diluant الى كل قنوات المنصه مع الهز الخفيف لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
24.يتم التخلص من سائل الكاشف اللوني للمتلازم الإنزيمي ((Substrate Diluant بداخل القنوات باستخدام الماصات البلاستيكية المعقمة ذات الإستخدام الواحد.
25.يضاف 2مل من محلول الكاشف اللوني للمتلازم الإنزيمي (Diluted Substrate Solution) المخفف والمحضر مسبقا الى جميع قنوات المنصه مع ثم تغطي المنصه بالغطاء البلاستيكي الشفاف وتوضع المنصه على الهزاز ((Orbital shaker في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
26.يتم التخلص من محلول الكاشف اللوني للمتلازم الإنزيمي (Diluted Substrate Solution) بداخل القنوات باستخدام الماصات البلاستيكية المعقمة ذات الإستخدام الواحد.
27.يضاف 2مل من الماء المقطر لجميع قنوات المنصه وتوضع المنصه على الهزاز Orbital shaker لمدة 3 دقائق في درجة حرارة الغرفة (20 ºم - 25 ºم ) .
28.يتم التخلص من الماء المقطر بداخل القنوات باستخدام الماصات البلاستيكية المعقمة ذات الإستخدام الواحد.
29.تكرر الخطوة 27 والخطوة 28 .
30.يتم التقاط الأشرطة من القنوات باستخدام الملقط الخاص ثم توضع الأشرطة على ورق الترشيح لتجفيفها في مكان مظلم ثم تتم قرأة النتائج باستخدام بطاقة قرائة النتائج Reading Card .
31 ثم تحلل النتائج باستخدام الجدول Chart Interpretation وذلك لتحديد الأنواع الوراثيه المختلفة من الفيروس الكبدي "سي" في العينات المختبره.

مستر كريكووووو المشاكس, [٠٨.٠٧.١٦ ١٣:٤٩]
فحص وزراعة الدم Blood culture

يعتبر الدم في وضعه الطبيعي معقماً إلا أن بعض الكائنات الدقيقة قد تظهر فيه لسبب أو آخر Bacteremia

وقد تصل هذه الخلايا للدم لعدة اسباب وغالباً يتم القضاء عليها بفعل Macrophages والكبد والطحال إذا كان عددها قليلاً أما في حال وجودها بعدد كبير فقد لاتتمكن مناعة الجسم من القضاء عليها .

ويحدث تجرثم الدم بثلاثة أشكال وهي :

1- تجرثم الدم العابر ( قصير الأمد ) Transient Bacteremia :
وذلك عند مرور البكتيريا في الدم لمدة قصيرة والتي يكون مصدرها من خارج الأوعية الدموية مثل أوعية الأنف أو نتيجة القرحة المعدية وتكون هذه المرحلة بدون أعراض .

2- تجرثم الدم المتردد Inntermittent Bacteremia :
يكون مصدر الجراثيم البكتيرية من خارج الأوعية الدموية مثل العقد اللمفية بحيث تنفذ إلى مجرى الدم لوجودها بعدد كبير وتكون هذه المرحلة ذات أعراض مثل القشعريرة وارتفاع درجة الحرارة وقد يؤدي للأصفرار في بعض الحالات .

تجرثم الدم الحاد Chronic Bacterimia :
وتكون أعداد البكتيريا بشكل كبير بسبب الألتهابات الحادة في الدم أو تكاثر البكتيريا في الدم أو وصولها للدم بعدد كبير مثل التهاب المرارة أو الطحال والكبد .

الكائنات المسببة لالتهاب الدم :
α-β Haemolytic streptococcus , Enterococci , Clostredium perfrenges , Proreus spp. , Nesseria meningitidis , Brucella spp. , Leptospira spp. , Staphylococcus coagulase +ve and –ve , Pneumococci , Haemophylous influenza and capsulatum , Pseudomonas spp. , Bacteroides spp. , Salmonella spp. , Viberio fetus and related vibrios , Nocardia , Bacterium dermatitidis , Candida .

خطوات فحص الدم :
تعتبر زراعة عينة الدم من أهم العينات التي تحدد نوع المرض مثل التهاب الرئة Pneumococcal pneumonia والتهاب السحايا البكتيري Bacterial meningitis والتهاب المسالك البولية وحمى التيفوئيد Typhoid fever و الأصابات بالسالمونيلا والتهاب الجروح Wound infictions والتهاب المرارة Infection off gall bladder والتهاب القناة الصفراوية والتهاب العظام والتهاب الغشاء المبطن للبطن .
ويتم جمع عينات الدم بسحبه مباشرة بواسطة إبرة معقمة مع مراعاة تعقيم الجلد باليود وكذلك بالكحول لمنع تلوث العينة بالميكروبات الموجودة على الجلد بحيث يسحب 10 – 12 ملل من الدم وتنقل العينة إلى أنبوب معقم به 3.4 ملل من مانع التجلط Lioquoid بتركيز 0.35 % مذاب في محلول saline ( هذا المانع مفيد في معادلة نشاط المضادات التالية خاصة إذا أخذ المريض أحداها قبل أخذ العينة مثل streptomycin , kanamycin , gentamycin , polymyxin ) أو يمكن استخدام مانع التجلط Na-citrate .
يؤخذ 5 ملل من الدم وتضاف إلى 100 ملل من بيئة Thioglycolate medium وذلك لتنمية البكتيريا اللاهوائية بحيث تحضن في ظروف لاهوائية . والباقي تضاف إلى قنينة بها 100 ملل من بيئة Trypticase soybroth .
و ينصح باستخدام قنينة محتوية على 100 ملل من المرق المغذي المكون من البيئات التالية :
Thioglycolate , Trypticase soybroth , Brain heart infusion , Pepton water , Broth Brucella . كما يتم إضافة 10 % سكروز و Penicillinase ( في حال أخذ المريض علاج البنسيلين ) و مانع للتجلط .
وتحضن القناني عند 35 – 37 ْم في ظروف هوائية بحيث تفحص يومياً خلال الأسبوع الأول وعدة مرات يومياً في الأسبوع الثاني للتأكد من وجود أو عدم وجود النمو البكتيري .

مستر كريكووووو المشاكس, [٠٨.٠٧.١٦ ١٣:٤٩]
ويكون النمو البكتيري بعدة أشكال وذلك بحسب الميكروب الموجود في الدم :
عند نمو العصويات السالبة لجرام تكون الطبقة فوق الخلايا الحمراء معكرة بشكل متناسق مع وجود فقاعات هوائية بسبب تخمر سكر الجلوكوز .
عند وجود Pneumococci أو Meningococci يشبه النمو السابق ولكن تكون نسبة العكورة أقل مع ظهور لون أخضر في البيئة .
تنمو Streptococci فقط في بيئة Thioglycolate وتظهر على شكل كرة قطنية على سطح راسب الخلايا الحمراء في قاع القنينة بينما تكون الطبقة العلوية من الميديا صافية دون شوائب .
وعند نمو beta haemolytic streptococci أو أي من محللات الدم فإن تحلل الدم يظهر بوضوح مع وجود العكورة .
عند نمو الممرضات من Staphylococci تُظهر طبقة متجلطة مثل الجيلي على سطح البيئة بفعل إنتاجها إنزيم Coagulase .
عند تلوث البيئة السائلة ببكتيريا Bacillus أو Saprophytic fungi فإنه يحصل تحلل للدم في الوسط السائل وسيتكون تجمعات سميكة على السطح .
تنمو بكتيريا Clostridium في بيئة الثيوجلايكوليت منتجة تحلل للدم مع ظهور رائحة عفنة وغاز تحت الضغط .
عند نمو H.influenza لايحدث أي تغير في البيئة ولابد من زراعتها مرة أخرى على وسط Chocolate agar .
عند الإستمرار في التحضين لمدة تزيد عن 10 أيام تزداد العكورة في بيئة الثيوجلايكوليت بسبب وجود الفيبرين الذي يتكون فوق طبقة خلايا الدم مما يسبب الإعتقاد بوجود نمو بكتيري .
وللتأكد من أن العكورة تحتوي على نمو بكتيري فلابد من عمل شريحة وصبغها بصبغة جرام .
عند التأكد من وجود نمو في البيئة تنقل عينة من المزرعة إلى طبق به بيئة Blood agar و أنبوب به Thioglycolate broth . وعند احتمالية وجود H.influenza تزرع على بيئة Chocolate agar . أما وجود العصويات السالبة لجرام فتنقل العينة إلى بيئة EMB أو Macconkey agar .
عند ظهور نتيجة إيجابية يفضل إجراء فحص التحسس للمضادات الحيوية .

وهناك طرق مفضلة لزراعة عينة الدم يفضل استخدامها في المعمل :
طريقة المزارع السائلة Broth culture procedure :
بعد 18 – 24 ساعة من التحضين للقنينة المحتوية على بيئة Thioglycolate تخلط القنينة جيداً وينقل واحد لوب منها ومن Blood broth إلى طبق من Bloood agar وطبق من Chocolate agar وفي نفس الوقت يحضر شريحة من Blood broth ( غشاء رقيق ) ويصبغ بصبغة جرام ويعاد تحضين القنينتين لإكمال فترة التحضين إلى 14 يوم .
تحضن أطباق Blood agar و Chocolate agar في Candle jar وتفحص الأطباق بعد 24 – 48 ساعة مع التخلص من الأطباق في حال كون النتيجة سالبة.
بعد 14 يوم من التحضين للقنينتين المحتويتين على بيئة Thioglycolate و بيئة Blood broth أعد الخطوة السابقة ( رقم 1 ) ثم تخلص من القنينتين السابقتين إذا كانت الشريحة تشير إلى نتيجة سالبة وكذلك الأطباق إذا كانت نتيجتها سالبة بعد تحضينها لمدة 48 ساعة .

طريقة مزارع الثيوجلايكوليت السائلة Thioglycolate culture broth :
بعد تحضين بيئة الثيوجلايكوليت لمدة 18 – 24 ساعة اعمل شريحة واصبغها بصبغة جرام وأعد الزراعة على طبق Blood agar وأنبوب Thioglycolate broth ثم حضنهما لمدة 24 – 48 ساعة إذا أعطت نتيجة سالبة تخلص من الطبق والأنبوب . مع الأخذ بعين الإعتبار استمرار التحضين للقنينة المحتوية على Thioglycolate لمدة 14 يوم .
بعد 14 يوم من التحضين أعد الخطوة السابقة ( رقم 1 ) وتخلص من القنينة والطبق والأنبوب إذا كانت النتيجة سالبة لكل منهم وكذلك إذا كانت نتيجة الشريحة سالبة وذلك بعد تحضين الأطباق الجديدة لمدة 48 ساعة .
عند ظهور بكتيريا في الشريحة ولم يظهر نمو على الأطباق المحضنة هوائياً فيجب عمل طبق من Blood agar وتحضينه في ظروف لاهوائية .

الأنظمة الآلية لمزارع الدم Automated blood culture systems :

مستر كريكووووو المشاكس, [٠٨.٠٧.١٦ ١٣:٤٩]
يوجد في الوقت الحاضر العديد من الأنظمة الحديثة والآلية لفحص عينة مزرعة الدم وتحديد وجود النمو في مزارع الدم بحيث يتم باستخدامها توفير الوقت في سرعة تحديد ومعرفة حدوث النمو للبكتيريا وكذلك الدقة في التحديد .
وتقوم هذه الطرق بقياس النمو وتحديده بقياس نسبة ثاني أكسيد الكربون الناتج من تحلل السكر في المزرعة . ومن هذه الأنظمة الأكثر شيوعاً :
نظام Bactec :
تعتمد هذه الطريقة على قياس نسبة ثاني أكسيد الكربون في مزرعة الدم وذلك بطريقتين :
تعتمد على قياس نسبة ثاني أكسيد الكربون بالطريقة الإشعاعية بحيث يستخدم مركب السكر المحتوي على الكربون المشعglucose 14 C بحيث تستهلكه البكتيريا وتنتج ثاني أكسيد الكربون المحتوي على الكربون المشع . وبالتالي يتم قياس نسبة ثاني الكربون المنتج في المزرعة والمحتوي على الكربون المشع لتحديد وجود النمو البكتيري من عدمه ( أي عند عدم وجود ثاني أكسيد الكربون المشع في المزرعة يدل على عدم وجود البكتيريا ) .
تقاس كمية ثاني أكسيد الكربون في بداية الزراعة ثم تتابع القياسات لمعرفة الزيادة في كمية ثاني أكسيد الكربون كمؤشر لوجود البكتيريا ونموها وذلك باستخدام جهاز المطياف المزود بالأشعة تحت الحمراء Infrared spectrophotometer .

نظام Bac-T/Alert :
يعتمد هذا النظام على قياس تغير لون المزرعة بسبب زيادة نسبة ثاني أكسيد الكربون في المزرعة والذي يؤدي بدوره إلى تغير PH الوسط من قاعدي إلى حامضي والذي يدل عليه تغير لون الدليل المضاف للمزرعة وباستخدام جهاز الطيف الضوئي العادي يمكن قياس التغير في لون الوسط المزروع .

الطرق غير المزرعية :
وذلك من خلال الكشف عن الأنتيجينات البكتيرية أوالأجسام المضادة الخاصة بمسبب المرض وذلك بالطرق المصلية مثل استخدام فحص Latex agglutination وطريقة ELISA .
كما يمكن استخدام تقنية PCR للكشف عن العديد من جراثيم الدم .
ويمكن استخدام طريقة الكروماتوجرافي للكشف عن وجود نواتج الأيض الناتجة من الميكروب مثل الأحماض الدهنية والسموم

لتنشيط الذاكرة 50 سؤال وجواب في الأحياء الدقيقة:
- طفيل نستطيع الكشف عنه بالعين المجردة في عينة الدم للمريض:
- بلازموديوم plasmodum
- أبتوشين optochin هي مادة كيميائية تستخدم لتمييز نوع من أنواع البكتيريا وهو :
- ستربتوكوكس نيمونيا streptococcus pneumonia
- من أهم العينات التي يتم قبولها في تقييم البكتيريا اللاهوائية هي :
- السائل البروتوني peritonal fluid
- نيسيريا neisseria هي نوع من أنواع البكتيريا التي نستطيع معرفتها وتمييزها بواسطة :
- فحص استهلاك الكربوهيدرات carbohydrate utilization
- عينة بول وصلت الى المعمل للزراعة , عندما الأخصائي لم يستطع زراعتها فورا يجب أن توضع في :
- نضعها في الثلاجة refrigerator
- عينة لزراعة الفيروسات تم جمعها يوم الجمعة وتم عمل فحوص لها استمرت لليوم التالي, عامة يتم حفظ العينة الفيروسية عند درجة حرارة:
- 4 درجات مئوية
- بكتيريا عصوية سالبة الجرام تم فصلها من مريض يعاني من حروق من الدرجة الثانية والثالثة , وتعطي على الميديا لون أخضر مزرق ولها رائحة نفاذة وكريهة وتعطي مع فحص الاكسيديز موجب ماهي هذه البكتيريا ؟
- سيدومونس pseudomonas
- التعقيم الالكتروني للمنابت البكتيرية باستخدام الاوتوكلاف في المعمل تعمل عند :
- 15 psi at 121C for 15 min /// عند درجة حرارة 121درجه مئوية لمده 15 دقيقة .
- عند استخدام كحول الأسيتون في خطوات عمل صبغة الجرام للبكتيريا فأن الستربتوكوكس والنيسيريا تصبغان بلون :
- بنفسجي purple
- فطر ينمو بسرعة على sabrouraud dextrose agar على شكل مستعمرات بيضاء اللون وله ابواغ خضراء مزرقة , ماهو هذا الفطر؟
- أسبيروجيلس aspergilli's
- ماهي وظيفة محلول 10% هيدروكسيد البوتاسيوم والمستخدم في الفحوص الفطرية عندما تؤخذ عينة من الشعر أو الجلد أو الأظافر من المريض ؟
- إزالة وتذويب الزوائد clear and dissolve debris
- فطر yeast موجود بشكل طبيعي في الفم و قناة الحنجرة ويكون ذو خطورة كامنة على الجسم , ماهو هذا الفطر ؟
- كانديدا البي كانز candida albicans
- طريقة التحضير المباشر باستخدام اليود تكون مفيدة جدا في الطفيليات للكشف عن:
- Cysts
- تظهر مستعمرات الكوليرا على ميديا الTCBSعلى شكل :
- Yellow Colones مستعمرات صفراء اللون
- نوكارديا nocardia والتي تسبب مرض Nocardisis تعتبر :
- Partially acid fast
- نوع من الميديا تحتوى على محتوى عالي من البروتين وتحتاج إلى درجة عالية من التعقيم , ماهي هذه الميديا ؟
- لونستون جنسون اجج Lowenstein – jenson egg media التي تستخدم للكشف عن بكتيريا المسببة للسل الرئوي.
- في فحص ONPG test نحن نقوم بالكشف عن :
- الكشف عن وجود أو غياب أنزيم beta – galactosidase في الميكروب
- نوع من البكتيريا يسببQ fever ماهي هذه البكتيريا :
- كوكسيلا بيرناري Coxiella burnerii
- الطور المعدي والذي يمكن تشخيصه في طفيل Strongyloides stercoralis هو:
- Larva
- طفل عمره 8 سنوات مصاب بإصابة فطرية حيث تم كشف إصابة ب Tinea Capitis في المريض , ماهي صفات هذا الفطر على المنبت الفطري ؟
- صفاته spindle shaped , thick willed macro conidia with an asymmetric terminal knob
- في فحص السل الرئوي Tuberculosis من الاحتياطات المعملية التي تقلل من خطر الإصابة المكتسبة بالبكتيريا في المعامل , نحن نمنع انتشار هذه البكتيريا ب
- Aerosol production
- رجل عمره 24 عاما تم فحص سائل Cerebrospinal له فظهر في التشخيص أعداد ضخمة من Mono nucler Cells , قمنا بعمل مزرعة بكتيريا روتينية له فظهرت النتيجة سالب , وتم قياس الجلوكوز و البروتين فوجدت في حالة طبيعة ماهو مسبب المرض في هذه الحالة في توقعك ؟
- (وجود إصابة فيروسية)ومن المتوقع أنه مصاب بفيروس Herpes simplex virus
- عند عملية فصل Yeast من مريض مصاب بCandida Albicans هناك فحص مهم يتم عمله ماهو :
- Germ tube test
- مريضة تعاني من إفرازات مهبلية viaginal discharge وتم تشخيص الإصابة على أنها Bactrial vaginlosis وتم رؤية clue cell في التشخيص
ماهي البكتيرية المتوقعة في هذه الحالة ؟
- البكتيريا هي Gardnerella vaginalis
- بكتيريا عصويا موجبة الجرام ليس لها كبسولة وليست متحركة وتنتظم على شكل حروف صينية ولا تعتبر مدللة وتنمو على Blood tellurite agar وتعطي مستعمرات سوداء على الميديا خلال 48 ساعة في درجة حرارة 35درجة مئوية ماهي هذه البكتيريا
- كورني باكتيريم دفتيريا Corynebacterium diphtheriae
- بكتيرية عصوية موجبة الجرام لها كبسولة وتعتبر غير مدللة وتسبب أمراض خطيرة على الحيوان والإنسان ,وتصيب الإنسان عن طريق الاستنشاق في معظم الحالات ويتم صباغتها في المعمل بMcfadyean reaction ماهي هذه البكتيريا
- بكتيريا الجمرة الخبيثة Bacillus Anthrax

- بكتيريا كروية موجبة الجرام تظهر في أزواج أو تجمعات وتفصل على منبت دموي وتعطي beta hemolytic وتعطي في فحص الCatalase موجب وفي فحص Coagulase موجب ماهو اسم هذا الميكروب ؟
- ستافلوكوكس ايريس Staphylococcus aureus
- طفل صغير نتوقع أصابته بالسعال الديكي Whooping cough ماهي الميديا التي يتم فصل الميكروب عليها :
- Bordet – Gengou agar
- بكتيريا كروية مزدوجة Diplococci سالبة الجرام وتعتبر مدللة وتنمو على منبت Chocolate agar وتسبب مرض التهاب السحايا meningitis و مرض التسمم الدموي Septicaemia خصوصا في الأطفال , ماهي هذه البكتيريا ؟
- نيسيريا مننجايتس Neisseria Meningitis
- نوع من البكتيريا سالبة الجرام ينمو بشكل ممتاز على Hectoen entric agar (HE agar ) ماهي هذه البكتيريا ؟
- إي كولاي E. Coli .
- مريض يشك في اصابتة ببكتيريا francisella ماهي الميديا المتوقع زراعة الميكروب عليها ؟
- Cystine blood agar
- الحمى الروماتيزمية والالتهاب الكلوي الحبيبي هما مرضان يرتبطان بشكل كبير ببكتيريا :
- ستربتوكوكس بيوجينز Streptococcus Pyogenes
- قرحة المعدة Gastric Ulcer مرتبط بنوع من البكتيريا ؟ ماهي هذه البكتيريا ؟
- هيلكوباكتر بيروري Helicobacter Pylori
- من أهم الفحوص الشاملة والتي تستخدم مع المرضى المصابون بفيروس HIV ( مرض الايدز ) هو فحص :
- ELISA أليسا
- مرض يسمى Infectious mononucleosis مرتبط بفيروس , ماهو اسم هذا الفيروس
- فيروس ( ابشتن بار فيرس) Epstein Barr Virus
- البكتيريا التي تستطيع النمو في وجود أو غياب الأكسجين تسمى
- Facultative anaerobes متكافلة لا هوائية
- الطور التروفوزويتي Trophozoites في الجارديا لامبيلا Lamblia Giardia له شكل معين ؟ ماهي صفة هذا الشكل ؟
- يشبه شكل الاجاصة Pear- shaped
- حمي الماء الأسود Black water fever نوع من الملا ريا , ماهو الطفيل المسبب لهذا المرض ؟
- طفيل الفيسبيريم Plasmodium Falciparum
- كائنات ليست حقيقية الخلية ولاتملك أي نشاط ايضي إذا فصلت لوحدها, وتتألف من DNA أو RNAماهي هذه الكائنات؟
- الفيروسات Viruses
- نوع من البكتيريا موجبة الجرام وعصوية تنمولاهوائيا وتسبب مرض الغر غريناGas gangrene ؟ ماهي هذه البكتيريا ؟
- كلوسترديم برفرنجص perfringes Clostridium
- البكتيريا التي لا تحمل أسواط Flagella على جسدها تسمى :
- Atrichous
- ماهو اسم البكتيري التي تسبب مرض السعال الديكي Whooping cough؟
- بورتيديلا بيرتيوسس Bordetella Pertussis
- نوع من أنواع البكتيريا تعتبر سالبة الجرام كرويةعصوية و تحتاج إلى enriched media تحتوي على العاملين V&X لكي ينمو ماهي هذه البكتيريا ؟
- هيموفيلس أنفلونزا Haemophilus influenzae
- ماهو اسم الميديا المستخدم لزراعة ميكروب مرض السيلان Neisseria gonorrhoeae ؟
- ثاير مارتن ميديا Thayer- Martin agar
- ماهو اسم الميكروب المسبب لمرض التيتنس (القزاز) ؟
- Clostridium tetani كلوسترديم تيتاني
- عندما نقوم بالزراعة على طبق يحتوى على ماكونوكي أجار MacConkey agarتظهر مستعمرات ميكروب الE. Coli بلون ؟
- لون زهري لامع bright pink colonies
- دودة دبوسيه صغيرة تسمي ( بن وورم) Pin worm تتبع لعائلة الديدان الدائرية تصيب الأمعاء ويمكن أن تشخص بNIH swab , أو Scotch adhesive tape swab ماهو الاسم العلمي للدودة , وكيف تشخص في المريض ؟
- أنتروبيس فيرميكيلالس Enterobius Vermicularis وتشخص أما برؤية الدودة في عينة البراز أو برؤية البيض حول المنطقة الشرجية للمريض حيث تؤخذ مسحة من المريض .
- أذكر ثلاثة أنواع من الميديا التي لا تنمو عليها البكتيريا موجبة الجرام ؟
- ماكونوكي اجار macConkey agar , S.S agar,EMB agar , .
- كل أشكال بكتيريا الميكوباكتيريم Mycobacterium تعتبر Acid fast هل هذا صحيح ولا خطأ؟
- نعم صحيح
- نوع من الطفيليات يسبب مرض الدوسنتاريا Amoebic dysentery ويصيب الأمعاء ويسبب الإسهالماهو الاسم العلمي لهذا الطفيل ؟
- Entamoeba histolytica انتاميبا هستولوتيكا

موقع رائع يخص البكتريا