Die Überwachung etwaiger unerwünschter Wirkungen, einschließlich der Tumorentwicklung bei Modelltieren nach Inokulation eines spezifischen NA-Impfstoffs, sollte durchgeführt werden.
Die Verwendung von Tiermodellen wie transgenen Tieren oder spezifischen Zellen, die bereits von ersten genetischen Ereignissen auf dem Weg zur Entwicklung einer bösartigen Erkrankung betroffen sind, könnte genutzt werden, um die mögliche Erhöhung der Wahrscheinlichkeit für die Induktion bösartiger Tumore nach der NA-Impfung zu messen.
Die Induktion von Autoimmunität kann durch die Bildung von Anti-DNA-Antikörpern begünstigt werden. Aus Modellkrankheiten wie systemischem Lupus erythomatosus (SLE) geht hervor, dass das Vorhandensein von Anti-DNA-Antikörpern zumindest mit der Krankheit korreliert. Bisher wurde die Entwicklung von Anti-DNA-Antikörpern nach NA-Impfung von Tieren nicht beobachtet, aber Daten, die dies für einen spezifischen NA-Impfstoff belegen, sollten in einen Antrag aufgenommen werden.
Eine Toleranz aufgrund der langfristigen und schwachen Präsentation der Antigene für das Immunsystem wurde bisher nicht beobachtet, aber die Besorgnis über diesen potenziell gefährlichen Immunmechanismus sollte eine direktere Forschung zu diesem Punkt anregen.
Muskeln können mit Viren oder Bakterien infiziert sein, und es sollte nachgewiesen werden, dass die geimpfte NA nicht mit diesen Krankheitserregern interagiert. Virusinfektionen können auch eine Autoimmunerkrankung auslösen, z. B. wird angenommen, dass Polymyositis eine indirekte Folge einer HIV-Infektion ist. Der Muskel ist auch ein Ort für die Injektion von abgeschwächten Lebendimpfstoffen oder inaktivierten Impfstoffen in Gegenwart von Adjuvantien.
Lokale Verletzungen und das Vorhandensein von Adjuvantien führen zur Rekrutierung von APCs, B- und T-Zellen; lokal produzierte Zytokine können Myoblasten dazu veranlassen, als fakultative APCs zu fungieren.l3 Es sind Autoimmunerkrankungen bekannt, bei denen in Muskelfasern exprimierte Antigene als Autoantigene erkannt werden. Zu diesen Krankheiten gehören Myastheia gravis (Antikörper gegen ein Muskelautoantigen, den nikotinischen Acetylcholinrezeptor) und entzündliche Myopathien wie Polyrnyositis, Einschlusskörpermyositis und Dermatomyositis (Autoantikörper oder Immunkomplexe gegen vaskuläre Endothelkomponenten). Das Nichtvorhandensein dieser und anderer unerwünschter Wirkungen sollte nachgewiesen werden.
Präklinische Entwicklung eines NA-Impfstoffs und klinische Versuche
Die Entwicklung eines NA-Impfstoffs in Deutschland, die rekombinante DNA-Arbeiten im Labor und erste Tierversuche umfasst, fällt unter die Bestimmungen des deutschen Gesetzes zur Regelung von Fragen der Gentechnik (GenTG).
Alle Versuche mit gentechnisch veränderten Organismen (GVO) wie prokaryotischen oder eukaryotischen Zellen, Viren, Parasiten und Tieren, die mit Methoden der rekombinanten DNA-Technologie verändert wurden, müssen unter den Bedingungen der Anwendung in geschlossenen Systemen gemäß den EG-Richtlinien 90/219/EWG vom 23. April 1993 und 90/220/EWG vom 23. April 1990 durchgeführt werden. Jeder Mitgliedsstaat der Europäischen Union musste diese Richtlinien in ein entsprechendes Gesetz umsetzen, das für jeden Mitgliedsstaat gilt.
Das deutsche Gengesetz regelt die Einholung der Zustimmung der zuständigen nationalen Behörde für die absichtliche Freisetzung von GVO zu Forschungszwecken oder das Inverkehrbringen von Produkten, die CMOS enthalten oder daraus bestehen, gemäß der Richtlinie 90/220/EWG. GVO, für die eine Genehmigung für das Inverkehrbringen erteilt wurde, unterliegen nicht mehr der gesetzlichen Regelung. So fallen Arbeiten mit zugelassenen NA-Impfstoffen, rekombinanten Lebendimpfstoffen oder mit Nukleinsäuren oder rekombinanten Lebendimpfstoffen geimpften Menschen nicht unter die Regelungen des Gengesetzes.
Die Verwendung von Tiermodellen wie transgenen Tieren oder spezifischen Zellen, die bereits von ersten genetischen Ereignissen auf dem Weg zur Entwicklung einer bösartigen Erkrankung betroffen sind, könnte genutzt werden, um die mögliche Erhöhung der Wahrscheinlichkeit für die Induktion bösartiger Tumore nach der NA-Impfung zu messen.
Die Induktion von Autoimmunität kann durch die Bildung von Anti-DNA-Antikörpern begünstigt werden. Aus Modellkrankheiten wie systemischem Lupus erythomatosus (SLE) geht hervor, dass das Vorhandensein von Anti-DNA-Antikörpern zumindest mit der Krankheit korreliert. Bisher wurde die Entwicklung von Anti-DNA-Antikörpern nach NA-Impfung von Tieren nicht beobachtet, aber Daten, die dies für einen spezifischen NA-Impfstoff belegen, sollten in einen Antrag aufgenommen werden.
Eine Toleranz aufgrund der langfristigen und schwachen Präsentation der Antigene für das Immunsystem wurde bisher nicht beobachtet, aber die Besorgnis über diesen potenziell gefährlichen Immunmechanismus sollte eine direktere Forschung zu diesem Punkt anregen.
Muskeln können mit Viren oder Bakterien infiziert sein, und es sollte nachgewiesen werden, dass die geimpfte NA nicht mit diesen Krankheitserregern interagiert. Virusinfektionen können auch eine Autoimmunerkrankung auslösen, z. B. wird angenommen, dass Polymyositis eine indirekte Folge einer HIV-Infektion ist. Der Muskel ist auch ein Ort für die Injektion von abgeschwächten Lebendimpfstoffen oder inaktivierten Impfstoffen in Gegenwart von Adjuvantien.
Lokale Verletzungen und das Vorhandensein von Adjuvantien führen zur Rekrutierung von APCs, B- und T-Zellen; lokal produzierte Zytokine können Myoblasten dazu veranlassen, als fakultative APCs zu fungieren.l3 Es sind Autoimmunerkrankungen bekannt, bei denen in Muskelfasern exprimierte Antigene als Autoantigene erkannt werden. Zu diesen Krankheiten gehören Myastheia gravis (Antikörper gegen ein Muskelautoantigen, den nikotinischen Acetylcholinrezeptor) und entzündliche Myopathien wie Polyrnyositis, Einschlusskörpermyositis und Dermatomyositis (Autoantikörper oder Immunkomplexe gegen vaskuläre Endothelkomponenten). Das Nichtvorhandensein dieser und anderer unerwünschter Wirkungen sollte nachgewiesen werden.
Präklinische Entwicklung eines NA-Impfstoffs und klinische Versuche
Die Entwicklung eines NA-Impfstoffs in Deutschland, die rekombinante DNA-Arbeiten im Labor und erste Tierversuche umfasst, fällt unter die Bestimmungen des deutschen Gesetzes zur Regelung von Fragen der Gentechnik (GenTG).
Alle Versuche mit gentechnisch veränderten Organismen (GVO) wie prokaryotischen oder eukaryotischen Zellen, Viren, Parasiten und Tieren, die mit Methoden der rekombinanten DNA-Technologie verändert wurden, müssen unter den Bedingungen der Anwendung in geschlossenen Systemen gemäß den EG-Richtlinien 90/219/EWG vom 23. April 1993 und 90/220/EWG vom 23. April 1990 durchgeführt werden. Jeder Mitgliedsstaat der Europäischen Union musste diese Richtlinien in ein entsprechendes Gesetz umsetzen, das für jeden Mitgliedsstaat gilt.
Das deutsche Gengesetz regelt die Einholung der Zustimmung der zuständigen nationalen Behörde für die absichtliche Freisetzung von GVO zu Forschungszwecken oder das Inverkehrbringen von Produkten, die CMOS enthalten oder daraus bestehen, gemäß der Richtlinie 90/220/EWG. GVO, für die eine Genehmigung für das Inverkehrbringen erteilt wurde, unterliegen nicht mehr der gesetzlichen Regelung. So fallen Arbeiten mit zugelassenen NA-Impfstoffen, rekombinanten Lebendimpfstoffen oder mit Nukleinsäuren oder rekombinanten Lebendimpfstoffen geimpften Menschen nicht unter die Regelungen des Gengesetzes.
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Das deutsche Gengesetz vom 20. Juni 1990, das rekombinante DNA-Arbeiten in gewerblichen und nichtgewerblichen Forschungslaboratorien regelt, wurde am 12. Dezember 1994 dahingehend geändert, dass medizinische Behandlungen von Menschen mit GVO nicht unter dieses Gesetz fallen. Es war offensichtlich geworden, dass die genetische Veränderung menschlicher Körperzellen in vitro oder der Transfer von in vitro im genetisch veränderten menschlichen Körperzellen in den menschlichen Organismus nicht vollständig von einem Gesetz erfasst werden konnte, das die Erzeugung von GVO in wissenschaftlichen Laboratorien und die absichtliche Freisetzung von GVO in die Umwelt regeln sollte. Folglich fällt auch die Behandlung von Menschen mit Nukleinsäuren nicht unter das Gesetz.
Die Nukleinsäureimpfung ist eine besondere Form der Gentransfertherapie. Die Behandlung von Patienten im Rahmen einer Gentherapie ähnelt damit der Behandlung mit einem Arzneimittel, in diesem Fall dem Gentherapeutikum. Die medikamentöse Behandlung, die darauf abzielt, mögliche Risiken und die Wirksamkeit des Gentherapeutikums zu ermitteln, fällt daher unter die Regelungen des Arzneimittelgesetzes (AMG).
Vor kurzem wurde eine zentrale Expertenkommission unter der Schirmherrschaft der Bundesärztekammer (Kommentar von mir: "Keine Körperschaft des öffentlichen Rechts - ein nichtrechtsfähiger Verein mit damals Ulrich Montgomery an der Spitze") gebildet. Dieses Gremium mit der Bezeichnung "Kommission für somatische Gentherapie" berät die lokalen Ethikkommissionen an den einzelnen Universitäten und Forschungseinrichtungen, die nach dem Arzneimittelgesetz die Protokolle für klinische Prüfungen zu prüfen haben, und wird somit auch klinische Prüfungen mit NA-Impfstoffen und anderen Gentherapeutika prüfen. Die Anwendung von NA-Impfstoffen zu therapeutischen Zwecken kann, wenn sie überhaupt in Betracht kommt, von einem Arzt für einzelne Patienten durchgeführt werden. Ob zusätzliche Regelungen notwendig sind, um die Qualität und Sicherheit von prophylaktischen NA-Impfstoffen und anderen Gentherapeutika zu gewährleisten, für die noch keine Marktzulassung vorliegt, wird derzeit diskutiert.
Konzertiertes Verfahren zur Beantragung der Marktzulassung von NA-Impfstoffen
Seit dem 1. Januar 1995 hat die Europäische Agentur für die Beurteilung von Arzneimitteln (EMEA) ihre Arbeit aufgenommen. Die Genehmigung für das Inverkehrbringen von Arzneimitteln im Sinne von Teil A des Anhangs der Verordnung (EWG) Nr. 2309/93 des Rates, die "mittels eines der folgenden biotechnologischen Verfahren entwickelt wurden: - rekombinante DNA-Technologie, - kontrollierte Expression von Genen, die für biologisch aktive Proteine kodieren, in Prokaryonten und Eukaryonten, einschließlich trans- formierter Säugetierzellen. ..." wird von der Europäischen Kommission für alle Mitgliedsstaaten der EU im zentralisierten Verfahren eingeholt. Die Definition von biotechnologischen Arzneimitteln umfasst zukünftige Produkte für den somatischen Gentransfer beim Menschen wie virale oder nicht-virale Gentransfervektoren und trägerfreie Nukleinsäuren, unabhängig von ihrer Verwendung als Therapeutika oder Impfstoffe. Es gilt also auch für NA-Schutzimpfstoffe.
Die Nukleinsäureimpfung ist eine besondere Form der Gentransfertherapie. Die Behandlung von Patienten im Rahmen einer Gentherapie ähnelt damit der Behandlung mit einem Arzneimittel, in diesem Fall dem Gentherapeutikum. Die medikamentöse Behandlung, die darauf abzielt, mögliche Risiken und die Wirksamkeit des Gentherapeutikums zu ermitteln, fällt daher unter die Regelungen des Arzneimittelgesetzes (AMG).
Vor kurzem wurde eine zentrale Expertenkommission unter der Schirmherrschaft der Bundesärztekammer (Kommentar von mir: "Keine Körperschaft des öffentlichen Rechts - ein nichtrechtsfähiger Verein mit damals Ulrich Montgomery an der Spitze") gebildet. Dieses Gremium mit der Bezeichnung "Kommission für somatische Gentherapie" berät die lokalen Ethikkommissionen an den einzelnen Universitäten und Forschungseinrichtungen, die nach dem Arzneimittelgesetz die Protokolle für klinische Prüfungen zu prüfen haben, und wird somit auch klinische Prüfungen mit NA-Impfstoffen und anderen Gentherapeutika prüfen. Die Anwendung von NA-Impfstoffen zu therapeutischen Zwecken kann, wenn sie überhaupt in Betracht kommt, von einem Arzt für einzelne Patienten durchgeführt werden. Ob zusätzliche Regelungen notwendig sind, um die Qualität und Sicherheit von prophylaktischen NA-Impfstoffen und anderen Gentherapeutika zu gewährleisten, für die noch keine Marktzulassung vorliegt, wird derzeit diskutiert.
Konzertiertes Verfahren zur Beantragung der Marktzulassung von NA-Impfstoffen
Seit dem 1. Januar 1995 hat die Europäische Agentur für die Beurteilung von Arzneimitteln (EMEA) ihre Arbeit aufgenommen. Die Genehmigung für das Inverkehrbringen von Arzneimitteln im Sinne von Teil A des Anhangs der Verordnung (EWG) Nr. 2309/93 des Rates, die "mittels eines der folgenden biotechnologischen Verfahren entwickelt wurden: - rekombinante DNA-Technologie, - kontrollierte Expression von Genen, die für biologisch aktive Proteine kodieren, in Prokaryonten und Eukaryonten, einschließlich trans- formierter Säugetierzellen. ..." wird von der Europäischen Kommission für alle Mitgliedsstaaten der EU im zentralisierten Verfahren eingeholt. Die Definition von biotechnologischen Arzneimitteln umfasst zukünftige Produkte für den somatischen Gentransfer beim Menschen wie virale oder nicht-virale Gentransfervektoren und trägerfreie Nukleinsäuren, unabhängig von ihrer Verwendung als Therapeutika oder Impfstoffe. Es gilt also auch für NA-Schutzimpfstoffe.
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Das Antragsverfahren ist so gestaltet, dass es die Kriterien des "one door/one key"-Prinzips erfüllt, was kurze Prüfzeiten und die Erteilung der Zulassung in allen Mitgliedsstaaten der EU nach Einreichung eines einzigen Antrags ermöglicht. Nach diesem Verfahren wird die Zulassung von der Gemeinschaft innerhalb von 210 Tagen erteilt. Die Mitteilung über die Genehmigung für das Inverkehrbringen wird im "Amtsblatt der Europäischen Gemeinschaften" veröffentlicht. Das Antragsformat und die Antragsverfahren sind in der "Regelung der Arzneimittel in der Europäischen Gemeinschaft" beschrieben, z. B. in Band I1A, "Hinweise für Antragsteller auf Genehmigung für das Inverkehrbringen von Humanarzneimitteln in der Europäischen Gemeinschaft". Die rechtlichen Grundlagen für die Verfahren sind in Band I ("Rules Relating to Marketing Authorisation of Medicinal Prod- ucts for Human Use") (Amt für amtliche Veröffentlichungen der Europäischen Gemeinschaft, 2, Rue Mercier, L-2985 Luxemburg, (Tel. x-352-49-9281, Fax x-352-49- 0003) dargelegt und basieren u.a. auf der Verordnung (EWG) Nr. 2309/93 des Rates vom 22. Juli 1993 und der Richtlinie 93/39/EWG des Rates vom 14. Juni 1993.
Das zentralisierte Verfahren zur Erlangung der Genehmigung für das Inverkehrbringen umfasst die Einreichung eines Antragsdossiers bei der EMEA in London. Der Antrag sollte auf der Grundlage der Leitlinien und Mitteilungen an die Antragsteller verfasst werden, wie sie in den oben erwähnten veröffentlichten Vorschriften enthalten sind. Für NA-Impfstoffe sind die Notes for Guidance mit dem Titel "The Production and Quality Control of Medicinal Products Derived by Recombinant DNA Technology (Revision 1994)" und "Gene Therapy Products-Quality, Safety and Efficacy Aspects in the Production of Vectors and Genetically Modified Somatic Cells" sind wichtig.
Möglicherweise müssen weitere und spezifischere Leitlinien entwickelt werden. Der zentralisierte Überprüfungsprozess beginnt mit der Auswahl eines Berichterstatters und möglicherweise eines Mitberichterstatters aus den Reihen der Mitglieder des Ausschusses für die Beurteilung von Arzneispezialitäten (CPMP) oder der Mitglieder des Ausschusses für die Beurteilung von Tierarzneimitteln (CVMP). Der Berichterstatter und der Mitberichterstatter müssen den Antrag auf Unbedenklichkeit, Wirksamkeit, Qualität des Arzneimittels und mögliche Umweltrisiken (ER) prüfen und werden daher höchstwahrscheinlich Sachverständige mit bekanntem wissenschaftlichem und regulatorischem Hintergrund für die Erstprüfung auswählen. Innerhalb von 210 Tagen erstellt der Berichterstatter einen Beurteilungsbericht, der alle geprüften Aspekte des Produkts zusammenfasst und die Grundlage für die Entscheidung der Kommission über die Erteilung der Genehmigung für das Inverkehrbringen des betreffenden Arzneimittels bildet.
Die Berichterstatter erstellen auch einen Entwurf für eine Zusammenfassung der Produktmerkmale, geben Hinweise auf mögliche Einschränkungen und überprüfen den Text für die Etikettierung und Packungsbeilage. Sie bilden somit die Grundlage für die Entscheidung der Kommission über die Erteilung der Genehmigung für das Inverkehrbringen des betreffenden Arzneimittels.
Das zentralisierte Verfahren zur Erlangung der Genehmigung für das Inverkehrbringen umfasst die Einreichung eines Antragsdossiers bei der EMEA in London. Der Antrag sollte auf der Grundlage der Leitlinien und Mitteilungen an die Antragsteller verfasst werden, wie sie in den oben erwähnten veröffentlichten Vorschriften enthalten sind. Für NA-Impfstoffe sind die Notes for Guidance mit dem Titel "The Production and Quality Control of Medicinal Products Derived by Recombinant DNA Technology (Revision 1994)" und "Gene Therapy Products-Quality, Safety and Efficacy Aspects in the Production of Vectors and Genetically Modified Somatic Cells" sind wichtig.
Möglicherweise müssen weitere und spezifischere Leitlinien entwickelt werden. Der zentralisierte Überprüfungsprozess beginnt mit der Auswahl eines Berichterstatters und möglicherweise eines Mitberichterstatters aus den Reihen der Mitglieder des Ausschusses für die Beurteilung von Arzneispezialitäten (CPMP) oder der Mitglieder des Ausschusses für die Beurteilung von Tierarzneimitteln (CVMP). Der Berichterstatter und der Mitberichterstatter müssen den Antrag auf Unbedenklichkeit, Wirksamkeit, Qualität des Arzneimittels und mögliche Umweltrisiken (ER) prüfen und werden daher höchstwahrscheinlich Sachverständige mit bekanntem wissenschaftlichem und regulatorischem Hintergrund für die Erstprüfung auswählen. Innerhalb von 210 Tagen erstellt der Berichterstatter einen Beurteilungsbericht, der alle geprüften Aspekte des Produkts zusammenfasst und die Grundlage für die Entscheidung der Kommission über die Erteilung der Genehmigung für das Inverkehrbringen des betreffenden Arzneimittels bildet.
Die Berichterstatter erstellen auch einen Entwurf für eine Zusammenfassung der Produktmerkmale, geben Hinweise auf mögliche Einschränkungen und überprüfen den Text für die Etikettierung und Packungsbeilage. Sie bilden somit die Grundlage für die Entscheidung der Kommission über die Erteilung der Genehmigung für das Inverkehrbringen des betreffenden Arzneimittels.
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NA Impfstoffe gegen AIDS: Erste Schritte der Entwicklung
Mit dem Ziel, einen Impfstoff gegen AIDS zu entwickeln, haben wir Exprimierungskonstrukte für einzelne und mehrere Antigene des Simian Immunodeficiency Virus (SIVmac) aus Rhesusaffen entwickelt. Zunächst wurden verschiedene Promotoren mit der cDNA verknüpft, die die kodierende Region des Luciferase-Reportergens umfasst (ABB.1). 70 pg Plasmid-DNA (in 10 %iger Saccharoselösung), die die Luciferase-Expressionskonstrukte enthielten, wurden an einer einzigen Stelle in den Musculus semitendinosus und semimembranosus von 6 bis 8 Monate alten BALB/c-Mäusen beimpft. Nach 7, 21 und 64 Tagen nach der Inokulation wurden die Luciferase-Aktivitäten gemessen, um dieTranskriptionsaktivitäten der verwendeten Promotoren. Während der Housekeeping-Genpromotor von Rattenproto-ras lHa niedrige und schwankende Expressionsniveaus induzierte, konnte der Genpromotor der murinen Phosphoglyceratkinase (PGK) eine anhaltende und hochgradige Expression des Markergens induzieren. Das lentivirale Long Terminal Repeat (LTR) des akut virulenten Affenimmundefizienzvirus SIVsm-Pbj14 der Rußmangusten induzierte eine etwas stärkere Genexpression. Überraschenderweise wurde kein signifikanter Anstieg der Genaktivität beobachtet, wenn 25 pg eines Expressionskonstrukts, das die cDNA des Transaktivierungsgens des humanen Immundefizienzvirus Typ I umfasst, mit dem lentiviralen LTR-Luciferase-Konstrukt koinokuliert wurde. Eine optimale Genexpression wurde weiterhin mit dem zuvor beschriebenen Cytomegalovirus (CMV)-Intron A-Promotor erreicht.
Als Nächstes wurden die in ABB. 2 dargestellten Expressionskonstrukte für einzelne und mehrere SIVmac-Antigene erstellt. Die Plasmid-DNA (100pg) jedes dieser Konstrukte wurde über einen Zeitraum von 4 Wochen dreimal i.m. in Mäuse injiziert. Die Seren dieser Mäuse wurden eine Woche nach der letzten Inokulation in einem konventionellen Festphasen-Enzymimmunoassay (ELISA) auf bindende Antikörper unter Verwendung des SIVmac-Vollvirusantigens getestet. Mit den verschiedenen Konstrukten wurden Titer von 1:30 bis 1:100 nachgewiesen, was zeigt, dass die Induktion humoraler Antikörper mit diesen Expressionsgenen möglich war. Um sicherzustellen, dass nach der Inokulation des Expressionskonstrukts, das mehrere Gene von SIVmac umfasst, auch spezifische Antikörper gegen die enu-Genprodukte gebildet wurden, testeten wir auch die Reaktivität der Immunseren gegen rekombinantes gp130-ENV von SIVmac (Daten nicht gezeigt). Es waren Antikörper nachweisbar, was zeigt, dass das Konzept der Induzierung einer Immunität gegen mehrere Antigene unter Verwendung komplexer Expressionskonstrukte aus einem einzigen und nicht aus mehreren Expressionskonstrukten machbar war. Nach der DNA-Inokulation wurden keine unerwünschten Wirkungen festgestellt, aber es müssen noch strengere Tests zu spezifischen Sicherheitsfragen durchgeführt werden. Weitere Experimente werden die Entwicklung eines Impfstoffs gegen AIDS unter Verwendung komplexer Expressionskonstrukte von SIVmac für die i.m.-Inokulation von Rhesusaffen und die anschließende Infektion mit homologen und heterologen Viren umfassen.
ZUSAMMENFASSUNG
Nukleinsäure-Impfstoffe sind vielversprechende Kandidaten für einfach zu handhabende und kostengünstige Impfstoffe, die die Sicherheit von Subunit-Impfstoffen mit der Wirksamkeit von Lebendvirus-Impfstoffen kombinieren. Um eine Marktzulassung für einen Nukleinsäureimpfstoff in allen Mitgliedstaaten der Europäischen Union zu erhalten, muss ein einziges Antragsdossier bei der Europäischen Agentur für die Beurteilung von Arzneimitteln eingereicht werden. Hinweise zu den Daten, die zur Unterstützung der Anträge erforderlich sind, stehen zur Verfügung. Die präklinische Entwicklung von Nukleinsäureimpfstoffen muss gemäß den einschlägigen EG-Richtlinien, die in das deutsche Gengesetz umgesetzt wurden, in geschlossenen Systemen erfolgen. Klinische Prüfungen in Deutschland würden nach den bekannten Verfahren des deutschen Arzneimittelgesetzes durchgeführt, während das Gengesetz nicht anwendbar ist.
Mit dem Ziel, einen Impfstoff gegen AIDS zu entwickeln, haben wir Exprimierungskonstrukte für einzelne und mehrere Antigene des Simian Immunodeficiency Virus (SIVmac) aus Rhesusaffen entwickelt. Zunächst wurden verschiedene Promotoren mit der cDNA verknüpft, die die kodierende Region des Luciferase-Reportergens umfasst (ABB.1). 70 pg Plasmid-DNA (in 10 %iger Saccharoselösung), die die Luciferase-Expressionskonstrukte enthielten, wurden an einer einzigen Stelle in den Musculus semitendinosus und semimembranosus von 6 bis 8 Monate alten BALB/c-Mäusen beimpft. Nach 7, 21 und 64 Tagen nach der Inokulation wurden die Luciferase-Aktivitäten gemessen, um dieTranskriptionsaktivitäten der verwendeten Promotoren. Während der Housekeeping-Genpromotor von Rattenproto-ras lHa niedrige und schwankende Expressionsniveaus induzierte, konnte der Genpromotor der murinen Phosphoglyceratkinase (PGK) eine anhaltende und hochgradige Expression des Markergens induzieren. Das lentivirale Long Terminal Repeat (LTR) des akut virulenten Affenimmundefizienzvirus SIVsm-Pbj14 der Rußmangusten induzierte eine etwas stärkere Genexpression. Überraschenderweise wurde kein signifikanter Anstieg der Genaktivität beobachtet, wenn 25 pg eines Expressionskonstrukts, das die cDNA des Transaktivierungsgens des humanen Immundefizienzvirus Typ I umfasst, mit dem lentiviralen LTR-Luciferase-Konstrukt koinokuliert wurde. Eine optimale Genexpression wurde weiterhin mit dem zuvor beschriebenen Cytomegalovirus (CMV)-Intron A-Promotor erreicht.
Als Nächstes wurden die in ABB. 2 dargestellten Expressionskonstrukte für einzelne und mehrere SIVmac-Antigene erstellt. Die Plasmid-DNA (100pg) jedes dieser Konstrukte wurde über einen Zeitraum von 4 Wochen dreimal i.m. in Mäuse injiziert. Die Seren dieser Mäuse wurden eine Woche nach der letzten Inokulation in einem konventionellen Festphasen-Enzymimmunoassay (ELISA) auf bindende Antikörper unter Verwendung des SIVmac-Vollvirusantigens getestet. Mit den verschiedenen Konstrukten wurden Titer von 1:30 bis 1:100 nachgewiesen, was zeigt, dass die Induktion humoraler Antikörper mit diesen Expressionsgenen möglich war. Um sicherzustellen, dass nach der Inokulation des Expressionskonstrukts, das mehrere Gene von SIVmac umfasst, auch spezifische Antikörper gegen die enu-Genprodukte gebildet wurden, testeten wir auch die Reaktivität der Immunseren gegen rekombinantes gp130-ENV von SIVmac (Daten nicht gezeigt). Es waren Antikörper nachweisbar, was zeigt, dass das Konzept der Induzierung einer Immunität gegen mehrere Antigene unter Verwendung komplexer Expressionskonstrukte aus einem einzigen und nicht aus mehreren Expressionskonstrukten machbar war. Nach der DNA-Inokulation wurden keine unerwünschten Wirkungen festgestellt, aber es müssen noch strengere Tests zu spezifischen Sicherheitsfragen durchgeführt werden. Weitere Experimente werden die Entwicklung eines Impfstoffs gegen AIDS unter Verwendung komplexer Expressionskonstrukte von SIVmac für die i.m.-Inokulation von Rhesusaffen und die anschließende Infektion mit homologen und heterologen Viren umfassen.
ZUSAMMENFASSUNG
Nukleinsäure-Impfstoffe sind vielversprechende Kandidaten für einfach zu handhabende und kostengünstige Impfstoffe, die die Sicherheit von Subunit-Impfstoffen mit der Wirksamkeit von Lebendvirus-Impfstoffen kombinieren. Um eine Marktzulassung für einen Nukleinsäureimpfstoff in allen Mitgliedstaaten der Europäischen Union zu erhalten, muss ein einziges Antragsdossier bei der Europäischen Agentur für die Beurteilung von Arzneimitteln eingereicht werden. Hinweise zu den Daten, die zur Unterstützung der Anträge erforderlich sind, stehen zur Verfügung. Die präklinische Entwicklung von Nukleinsäureimpfstoffen muss gemäß den einschlägigen EG-Richtlinien, die in das deutsche Gengesetz umgesetzt wurden, in geschlossenen Systemen erfolgen. Klinische Prüfungen in Deutschland würden nach den bekannten Verfahren des deutschen Arzneimittelgesetzes durchgeführt, während das Gengesetz nicht anwendbar ist.
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Klinische Versuche sollten erst nach Zustimmung der unter der Schirmherrschaft der Bundesärztekammer gebildeten Kommission für Gentherapieversuche begonnen werden. Erfahrungen mit der intramuskulären Nukleinsäure-Inokulation von Tieren wurden mit Expressionskonstrukten gesammelt, die einzelne und mehrere Gene des Affen-Immunschwäche-Virus enthalten. Es wurden spezifische Antikörper gegen mehrere Antigene induziert. Es wurden keine nachteiligen Auswirkungen der Nukleinsäure-Inokulationen festgestellt, aber es müssen noch strengere Tests zu spezifischen Sicherheitsproblemen durchgeführt werden.
Der Autor dankt Stefan Wagener für die zur Verfügung gestellten experimentellen Daten, die zu den beschriebenen experimentellen Ergebnissen beigetragen haben, sowie für die konstruktiven Diskussionen mit Dr. Jungback, Dr. Lower und Dr. Schaffner während der Erstellung des Manuskripts.
Quelle: https://twitter.com/AnwaltUlbrich/status/1736051765240287248
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Der Autor dankt Stefan Wagener für die zur Verfügung gestellten experimentellen Daten, die zu den beschriebenen experimentellen Ergebnissen beigetragen haben, sowie für die konstruktiven Diskussionen mit Dr. Jungback, Dr. Lower und Dr. Schaffner während der Erstellung des Manuskripts.
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X (formerly Twitter)
Tobias Ulbrich (@AnwaltUlbrich) on X
Thema heute: "Schnittstelle Paul-Ehrlich-Institut (PEI) - völliges Versagen der Arzneimittelsicherheit?"
Das PEI ist in Deutschland für die Arzneimittelsicherheit zuständig. Gemeinsam mit dem Bundesministerium der Gesundheit sorgten sie aber mit den sog.…
Das PEI ist in Deutschland für die Arzneimittelsicherheit zuständig. Gemeinsam mit dem Bundesministerium der Gesundheit sorgten sie aber mit den sog.…
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„Wir reden deutsch“: Richter lehnt Antrag zum Gendern von Klimaaktivisten vor Gericht ab
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Aktivisten fühlen sich von Waffen der im Gerichtssaal anwesenden Polizisten bedroht
Angesichts der Antragsflut am vorausgegangenen Verhandlungstag, schien der Richter nicht sonderlich überrascht. Wenngleich er in weiser Voraussicht bereits vor Prozessbeginn das Kurzifix aus dem Gerichtssaal hatte entfernen lassen – was die Aktivisten bejubelten und mit Applaus bedachten. Sie fanden sich nun zwar nicht mehr (wie beim ersten Mal) durch Jesus Christus bedroht, dafür allerdings von den Schusswaffen der im Saal anwesenden Polizeibeamten.
Dementsprechend flatterte Richter Kaltbeitzer der nächste Antrag auf den Tisch: Die Beamten sollen ihre Pistolen abgeben. „Ich will niemandem was unterstellen, aber woher weiß ich, ob da nicht einfach wer zur Waffe greift und umherschießt“, lautete die Begründung der Angeklagten. Während dem Staatsanwalt dabei unter heftigem Kopfschütteln das Wort „absurd“ über die Lippen huschte, nahm der Richter den Antrag sichtlich unbekümmert zur Kenntnis. Ohne Diskussion lehnte er die Forderung der Aktivisten ab.
„Wir reden deutsch, Punkt“: Richter lehnt Antrag auf Gendern im Gericht ab
Doch deren Strategie lautete weiterhin: Verzögerung um jeden Preis. Noch bevor der erste Zeuge vernommen werden konnte, folgte der nächste Antrag. Diesmal forderten die Aktivisten, dass im Gericht gegendert wird. „Diese Art von Sprache, wie sie hier gesprochen wird, macht Menschen, die sich nicht als Mann identifizieren, unsichtbar“, betonte ein Angeklagter. Im Gesicht von Richter Kaltbeitzer zeigte sich nun erstmals ein Stirnrunzeln. „Wir reden deutsch“, widersprach er dem Antrag. Punkt.
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Die Migrationspolitik von Sunak: Ein Schritt zur Kontrolle der Globalisten über die nationale Souveränität?
Viele sehen in der jüngsten Rede des britischen Premierministers Rishi Sunak in Italien und in seiner allgemeinen Einwanderungspolitik eine zutiefst beunruhigende Verkörperung einer globalistischen Agenda, die nach Ansicht von Kritikern von den Interessen der Eliten auf Kosten der nationalen Souveränität und der Menschenwürde angetrieben wird.
Sunaks Ausrichtung auf die übergeordneten Ziele des Weltwirtschaftsforums (WEF) wird als eklatanter Verrat nicht nur am britischen Volk, sondern auch an den Grundsätzen der demokratischen Selbstverwaltung und der nationalen Integrität angesehen.
Die Kritik erstreckt sich nicht nur auf die Politik, sondern auch auf Sunaks Charakter und Führungsqualitäten. Seine Rede wird als unaufrichtiger Versuch bezeichnet, in der Einwanderungsfrage hart zu bleiben. Diese Taktik zielt eher darauf ab, parteiinterne Fraktionen zu besänftigen und sich mit internationalen Machtstrukturen zu arrangieren, als sich den wahren Herausforderungen der Migration zu stellen.
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Viele sehen in der jüngsten Rede des britischen Premierministers Rishi Sunak in Italien und in seiner allgemeinen Einwanderungspolitik eine zutiefst beunruhigende Verkörperung einer globalistischen Agenda, die nach Ansicht von Kritikern von den Interessen der Eliten auf Kosten der nationalen Souveränität und der Menschenwürde angetrieben wird.
Sunaks Ausrichtung auf die übergeordneten Ziele des Weltwirtschaftsforums (WEF) wird als eklatanter Verrat nicht nur am britischen Volk, sondern auch an den Grundsätzen der demokratischen Selbstverwaltung und der nationalen Integrität angesehen.
Die Kritik erstreckt sich nicht nur auf die Politik, sondern auch auf Sunaks Charakter und Führungsqualitäten. Seine Rede wird als unaufrichtiger Versuch bezeichnet, in der Einwanderungsfrage hart zu bleiben. Diese Taktik zielt eher darauf ab, parteiinterne Fraktionen zu besänftigen und sich mit internationalen Machtstrukturen zu arrangieren, als sich den wahren Herausforderungen der Migration zu stellen.
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Der Björn ist ja ein ganz ein Schlauer !
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Hier ist die Predigt (ohne Lieder) vom 17.12.2023 direkt auf Telegram
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Wenn sie nicht genug Geld haben müssen sie nur länger arbeiten. Logisch oder 🤷♂️
"Freizeitpark Deutschland"
Jens Spahn fordert längere Arbeitszeiten
Den Deutschen fehlt es an Geld.
Jens Spahn bringt eine Möglichkeit ins Spiel, mehr zu verdienen – und kritisiert den "Freizeitpark Deutschland".
Energie, Lebensmittel, der Restaurantbesuch: Fast alles ist in den letzten Jahren teurer geworden. Kurz gesagt: Die Deutschen brauchen mehr Geld. Um das zu erwirtschaften, schlägt der CDU-Politiker Jens Spahn im Interview mit der "Neuen Osnabrücker Zeitung" eine Verlängerung der wöchentlichen Arbeitszeit vor.
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Klimanotstand ist Wissenschaftsfälschung und Blödsinn! Interview mit Markus Fiedler
In diesem Video spricht Philip Hopf mit Markus Fiedler. Klimanotstand ist Wissenschaftsfälschung und Blödsinn! Interview mit Markus Fiedler. Ein weiteres Interview der HKCM.
📄Quellen:
https://markus-fiedler.de/2020/01/02/die-97-einigkeit-unter-wissenschaftlern…
📄Quellen:
https://markus-fiedler.de/2020/01/02/die-97-einigkeit-unter-wissenschaftlern…
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Aufstand der Bauern
Die Regierung will 1 Mrd. bei Bauern kassieren. Massenprotest ab Montag. Vorbild für alle?
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Die ÖR Propagandaschau, versteht nicht, warum sich immer weniger Menschen impfen lassen....
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Forwarded from Stefan Magnet
Heiko Schöning: „Das wird größer als Corona!“
Dieses Interview musste noch vor Weihnachten gemacht werden. Nach monatelangen Recherchen ist sich HEIKO SCHÖNING sicher, wie der Bio-Waffen-Angriff ablaufen wird.
Zum „Grossen Interview AUF1“: ▶️ https://auf1.tv/das-grosse-interview/heiko-schoening-sagt-voraus-angriff-aufs-mikrobiom-das-wird-groesser-als-corona
Dieses Interview musste noch vor Weihnachten gemacht werden. Nach monatelangen Recherchen ist sich HEIKO SCHÖNING sicher, wie der Bio-Waffen-Angriff ablaufen wird.
Zum „Grossen Interview AUF1“: ▶️ https://auf1.tv/das-grosse-interview/heiko-schoening-sagt-voraus-angriff-aufs-mikrobiom-das-wird-groesser-als-corona
auf1.tv
Heiko Schöning sagt voraus: Angriff aufs „Mikrobiom“ — das wird größer als Corona!
Der deutsche Arzt und Analyst Heiko Schöning warnt bei Stefan Magnet im „großen Interview AUF1“ vor einer bevorstehenden weltweiten Attacke auf die öffentliche Gesundheit.
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